Руководящие принципы ВОЗ по взятию образцов у людей для лабораторной диагностики инфекции птичьего гриппа

12 января 2005 г.

Общая информация

Для диагностики респираторных вирусов большое значение имеет высокое качество взятых образцов, их быстрая транспортировка в лабораторию и надлежащее хранение перед лабораторным тестированием. Для выявления вирусов лучше всего подходят образцы, содержащие инфицированные клетки и секреты. Образцы для прямого выявления вирусных антигенов или нуклеиновых кислот и изолирования вируса в клеточных культурах предпочтительнее брать в течение первых 3 дней после появления клинических симптомов.

Типы образцов

Для диагностики вирусных инфекций верхних дыхательных путей подходят различные образцы:

• назальный мазок
• носоглоточный мазок
• носоглоточный аспират
• назальный смыв
• мазок из зева.

Кроме мазков из верхних дыхательных путей при наличии клинических показаний для диагностики вирусных инфекций нижних дыхательных путей можно проводить инвазивные процедуры:

• транстрахеальный аспират
• бронхоальвеолярный лаваж
• биопсию легких
• посмертное взятие ткани легких или трахеи.

Образцы для лабораторной диагностики птичьего гриппа А необходимо брать в следующей последовательности:

• носоглоточный аспират
• сыворотка крови острого периода
• сыворотка крови периода выздоровления.

Образцы, предназначенные для прямого выявления вирусных антигенов посредством иммунофлюоресцентного окрашивания инфицированных клеток, необходимо хранить в холодном месте и обрабатывать в течение 1-2 часов. Образцы, предназначенные для использования в имеющихся в коммерческой продаже тестах, проводимых у постели пациента, необходимо хранить в соответствии с инструкциями производителя. Образцы для изолирования вирусов должны быть помещены в холодное место сразу же после их взятия и как можно скорее инокулированы в чувствительные клеточные культуры. В случае если обработка образцов не может быть произведена в течение 48-72 часов, они должны быть заморожены при температуре –70 °С или ниже.

Образцы из дыхательных путей необходимо брать и транспортировать в транспортной среде для вирусов. В коммерческой продаже имеется целый ряд сред, подходящих для разнообразных вирусов.

Методика взятия образцов

Необходимые материалы

• Контейнер-сборник для мокроты/слизи
• Полиэфирный зонд с волоконным наконечником
• Пластмассовые пробирки
• Шпатель для отдавливания языка
• 15 мл конические пробирки для центрифуги
• Чашка для взятия образцов или блюдо Петри
• Переносящие пипетки

Транспортная среда для вирусов

(A) Транспортная среда для вирусов, используемая для взятия мазков из зева и назальных мазков

• Добавить 10 г телячьего бульона и 2 г фракции V бычьего альбумина в стерильную дистиллированную воду (до 400 мл).
• Добавить 0,8 мл раствора гентамицина сульфата (50 мг/мл) и 3,2 мл амфотерицина В (250мг/мл).
• Провести стерилизующую фильтрацию.

(B) Среда для назальных мазков

1. Стерильный физиологический раствор (0,85% NaCl).

Подготовка к взятию образцов

Клинические образцы необходимо брать указанными ниже способами и помещать в транспортную среду. Назальные или носоглоточные мазки можно помещать в одну и ту же пробирку с транспортной средой для вирусов. По возможности в Форме для сбора данных в полевых условиях (на английском языке) следует указывать следующую информацию: общую информацию о пациенте, тип образца, дату взятия образца, контактную информацию о лице, заполняющем форму, и т.п.

Необходимо всегда соблюдать стандартные меры предосторожности, а при взятии образцов у пациентов - барьерные меры защиты.

Назальный мазок
Сухой полиэфирный зонд-тампон ввести на несколько секунд в ноздрю параллельно небу. Затем вращательными движениями медленно вынуть зонд. Образцы из обеих ноздрей берутся одним и тем же зондом. Наконечник зонда ввести в пластмассовую пробирку, содержащую 2-3 мл транспортной среды для вирусов, и отломить стержень аппликатора.

Носоглоточный мазок
Полиэфирный зонд с гибким, тонким стержнем ввести в ноздрю и далее в носоглотку на несколько секунд. Затем вращательными движениями медленно вынуть зонд. Для второй ноздри следует использовать другой зонд. Наконечник зонда ввести в пробирку, содержащую 2-3 мл транспортной среды для вирусов, и обрезать стержень.

Носоглоточный аспират
Аспирировать носоглоточные секреты через катетер, соединенный с контейнером-сборником для слизи и источником вакуума. Катетер вводится в ноздрю параллельно небу. Привести в действие источник вакуума и медленно вынуть катетер вращательными движениями. Слизь из другой ноздри берется тем же катетером аналогичным способом. После взятия слизи из обеих ноздрей катетер заливается 3 мл транспортной среды.

Назальный смыв
Посадить пациента в удобную позу со слегка откинутой назад головой и порекомендовать ему держать глотку закрытой, произнося звук "К", во время вливания в ноздрю промывочной жидкости (обычно физиологического раствора). С помощью переносящей пипетки в одну ноздрю влить 1-1,5 мл промывочной жидкости. Затем пациент должен наклонить голову вперед для того, чтобы промывочная жидкость вытекла в чашку для образцов или блюдо Петри. Повторять эту процедуру с двумя ноздрями поочередно до тех пор, пока не будет использовано, в общей сложности, 10-15 мл промывочной жидкости. Налить примерно 3 мл промывочной жидкости в пропорции 1:2 в транспортную среду.

Мазок из зева
Энергично потереть обе миндалины и заднюю стенку зева и поместить мазок в транспортную среду, как указано выше.

Взятие сывороток для диагностики гриппа

Образцы сыворотки острой фазы (3-5 мл цельной крови) необходимо брать вскоре после появления клинических симптомов и не позднее 7 дней после их появления. Образец сыворотки фазы выздоровления необходимо брать через 14 дней после появления симптомов болезни. В случае если пациент находится при смерти, необходимо взять второй образец до наступления смерти.

Несмотря на то, что единичные образцы сыворотки могут не предоставлять убедительных свидетельств в поддержку конкретного диагноза, образцы, взятые более чем через две недели после появления симптомов, могут оказаться полезными для выявления антител к вирусам птичьего гриппа при проведении теста нейтрализации.